Publicação
Avaliação da qualidade das amostras de biópsias líquidas de pacientes com tumores urológicos, colhidas e armazenadas no Biobanco-iMM, CAML
| Resumo: | O Biobanco-iMM é uma estrutura sem fins lucrativos integrada no Centro Académico de Medicina de Lisboa (CAML). Criada em 2008 no Instituto de Medicina Molecular (iMM-JLA) tem como principal objetivo promover a investigação biomédica.1 A oncologia é umas das áreas de investigação mais ativas atualmente, nomeadamente na procura de novas terapêuticas e métodos de diagnóstico. Tendo isto em consideração, desenvolveu-se este projeto cujos objetivos foram avaliar a qualidade das biopsias líquidas existentes na coleção de Tumores e capacitar a coleção com novos recursos biológicos, de forma a ir de encontro às novas exigências da comunidade científica. Para isso avaliou-se a estabilidade genómica do DNA armazenado, testando-se a pureza, integridade e a qualidade para aplicações downstream, isolou-se exossomas a partir de soro armazenado, avaliando-se posteriormente a sua qualidade, e testou-se a possibilidade de implementar um serviço de enriquecimento de células tumorais circulantes (CTCs). Da avaliação da estabilidade do DNA apenas a pureza revelou alterações significativas ao longo do tempo de armazenamento, no entanto todas as amostras mantêm-se dentro dos padrões de qualidade, quer sob a forma de DNA quer sobre a forma de ST. O isolamento de exossomas a partir de soro armazenado revelou-se simples, no entanto com alguma contaminação. Os arrays realizados demonstraram a possibilidade de identificar marcadores específicos mesmo após armazenamento. Para a implementação do método de enriquecimento de CTCs testaram-se dois kits da StemCell revelando-se o RosettSep o método com resultados mais puros. A implementação não foi, no entanto, bem-sucedida devido a problemas na deteção das CTCs. A qualidade das amostras é uma das maiores preocupações de quem utiliza biobancos. Com este trabalho foi possível confirmar a qualidade das amostras armazenadas pelo Biobanco na coleção de Tumores, nomeadamente DNA e soro para extração de exossomas. Do ponto de vista científico, com este projeto foi possível criar e disponibilizar à comunidade científica um importante recurso, o banco de exossomas. |
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| Autores principais: | Rodrigues, Fabiana Cândida da Rocha, 1990- |
| Assunto: | Biobanco Biópsias líquidas CTC Exossomas DNA Teses de mestrado - 2019 |
| Ano: | 2019 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | O Biobanco-iMM é uma estrutura sem fins lucrativos integrada no Centro Académico de Medicina de Lisboa (CAML). Criada em 2008 no Instituto de Medicina Molecular (iMM-JLA) tem como principal objetivo promover a investigação biomédica.1 A oncologia é umas das áreas de investigação mais ativas atualmente, nomeadamente na procura de novas terapêuticas e métodos de diagnóstico. Tendo isto em consideração, desenvolveu-se este projeto cujos objetivos foram avaliar a qualidade das biopsias líquidas existentes na coleção de Tumores e capacitar a coleção com novos recursos biológicos, de forma a ir de encontro às novas exigências da comunidade científica. Para isso avaliou-se a estabilidade genómica do DNA armazenado, testando-se a pureza, integridade e a qualidade para aplicações downstream, isolou-se exossomas a partir de soro armazenado, avaliando-se posteriormente a sua qualidade, e testou-se a possibilidade de implementar um serviço de enriquecimento de células tumorais circulantes (CTCs). Da avaliação da estabilidade do DNA apenas a pureza revelou alterações significativas ao longo do tempo de armazenamento, no entanto todas as amostras mantêm-se dentro dos padrões de qualidade, quer sob a forma de DNA quer sobre a forma de ST. O isolamento de exossomas a partir de soro armazenado revelou-se simples, no entanto com alguma contaminação. Os arrays realizados demonstraram a possibilidade de identificar marcadores específicos mesmo após armazenamento. Para a implementação do método de enriquecimento de CTCs testaram-se dois kits da StemCell revelando-se o RosettSep o método com resultados mais puros. A implementação não foi, no entanto, bem-sucedida devido a problemas na deteção das CTCs. A qualidade das amostras é uma das maiores preocupações de quem utiliza biobancos. Com este trabalho foi possível confirmar a qualidade das amostras armazenadas pelo Biobanco na coleção de Tumores, nomeadamente DNA e soro para extração de exossomas. Do ponto de vista científico, com este projeto foi possível criar e disponibilizar à comunidade científica um importante recurso, o banco de exossomas. |
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