Publicação
Investigating the role of candidate genes in the transport of TPP and LOS in Mycobacterium smegmatis
| Resumo: | A tuberculose apresenta-se como uma emergência global de saúde pública, devido principalmente ao surgimento de novas estirpes multirresistentes de Mycobacterium tuberculosis, que assim impulsionam o desenvolvimento de novas opções terapêuticas. A presença de uma parede celular lipídica nas micobactérias apresenta-se como um mecanismo importante de patogenicidade causado em parte pela grande diversidade de lípidos expostos à superfície da membrana externa. Entre eles, o TPP e o LOS, lípidos sintetizados por uma grande variedade de micobactérias não tuberculosas (MNT), incluindo o organismo modelo não patogénico de crescimento rápido, o Mycobacterium smegmatis (Msmeg). Por outro lado, a compreensão integral das diversas vias metabólicas relacionadas com o transporte destes lípidos permanece ainda pouco caracterizada. Neste estudo, investigamos o papel de diversos genes candidatos ao transporte do TPP e do LOS nomeadamente gap-Like/lprG e gap2, respetivamente, avaliando o impacto da depleção destes genes no transporte destes lípidos, no organismo modelo micobacteriano Msmeg. Pretendemos ainda validar a ligação entre a morfologia lisa e arredondada das colónias de Msmeg mc2155 e a produção de LOS, com a intenção, no futuro, destes resultados possibilitarem a identificação de novos genes envolvidos no transporte do LOS com base na morfologia das colónias. Segundo os resultados obtidos, as proteínas Gap-Like não parecem estar envolvidas na síntese ou transporte do TPP em Msmeg. No entanto, no futuro, seria interessante silenciar a síntese destas mesmas proteínas numa espécie MNT alternativa que produza TPP e comparar com os resultados obtidos em Msmeg. Quanto ao envolvimento da proteína LprG no transporte do TPP, os resultados mostraram uma ligeira diferença de entre os clones em estudo, quando o lprG é silenciado, indicando assim uma possível associação entre a lipoproteína e o transporte de TPP em Msmeg. Assim, estudos futuros deverão focar-se na avaliação da presença de TPP nas frações lipídicas superficiais desses clones. Relativamente ao lípido LOS, os dados obtidos permitem-nos concluir que a proteína Gap2 não desempenha um papel significativo nas vias de síntese ou de transporte do lípido. Por fim, conseguimos ainda validar a relação entre a morfologia lisa das colónias de Msmeg e a produção de LOS, analisando a morfologia das colónias de uma série de estirpes produtoras ou não deste lípido. Este trabalho permitirá assim, no futuro, estabelecer uma abordagem de seleção genética de forma a encontrar-se novos genes envolvidos no transporte do LOS. |
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| Autores principais: | Fevereiro, Diogo António da Costa |
| Assunto: | Lipid transport Glycolipid TPP LOS Mycobacterium smegmatis Mestrado integrado - 2022 |
| Ano: | 2022 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso embargado |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | A tuberculose apresenta-se como uma emergência global de saúde pública, devido principalmente ao surgimento de novas estirpes multirresistentes de Mycobacterium tuberculosis, que assim impulsionam o desenvolvimento de novas opções terapêuticas. A presença de uma parede celular lipídica nas micobactérias apresenta-se como um mecanismo importante de patogenicidade causado em parte pela grande diversidade de lípidos expostos à superfície da membrana externa. Entre eles, o TPP e o LOS, lípidos sintetizados por uma grande variedade de micobactérias não tuberculosas (MNT), incluindo o organismo modelo não patogénico de crescimento rápido, o Mycobacterium smegmatis (Msmeg). Por outro lado, a compreensão integral das diversas vias metabólicas relacionadas com o transporte destes lípidos permanece ainda pouco caracterizada. Neste estudo, investigamos o papel de diversos genes candidatos ao transporte do TPP e do LOS nomeadamente gap-Like/lprG e gap2, respetivamente, avaliando o impacto da depleção destes genes no transporte destes lípidos, no organismo modelo micobacteriano Msmeg. Pretendemos ainda validar a ligação entre a morfologia lisa e arredondada das colónias de Msmeg mc2155 e a produção de LOS, com a intenção, no futuro, destes resultados possibilitarem a identificação de novos genes envolvidos no transporte do LOS com base na morfologia das colónias. Segundo os resultados obtidos, as proteínas Gap-Like não parecem estar envolvidas na síntese ou transporte do TPP em Msmeg. No entanto, no futuro, seria interessante silenciar a síntese destas mesmas proteínas numa espécie MNT alternativa que produza TPP e comparar com os resultados obtidos em Msmeg. Quanto ao envolvimento da proteína LprG no transporte do TPP, os resultados mostraram uma ligeira diferença de entre os clones em estudo, quando o lprG é silenciado, indicando assim uma possível associação entre a lipoproteína e o transporte de TPP em Msmeg. Assim, estudos futuros deverão focar-se na avaliação da presença de TPP nas frações lipídicas superficiais desses clones. Relativamente ao lípido LOS, os dados obtidos permitem-nos concluir que a proteína Gap2 não desempenha um papel significativo nas vias de síntese ou de transporte do lípido. Por fim, conseguimos ainda validar a relação entre a morfologia lisa das colónias de Msmeg e a produção de LOS, analisando a morfologia das colónias de uma série de estirpes produtoras ou não deste lípido. Este trabalho permitirá assim, no futuro, estabelecer uma abordagem de seleção genética de forma a encontrar-se novos genes envolvidos no transporte do LOS. |
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