Publicação

Perfil de expressão dos microRNAs, miR-122 e miR-22, em doentes com hepatite crónica C

Detalhes bibliográficos
Resumo:	A infecção pelo Vírus da Hepatite C (VHC) atinge 200 milhões de pessoas em todo mundo. A maioria dos infectados VHC adquire uma infecção persistente no fígado que origina uma hepatite crónica. A Hepatite Crónica C pode levar a uma cirrose hepática, e consequentemente, conduzir à falha hepática ou ao hepatocarcinoma humano (HCC). Não existe vacina e a terapêutica disponível para o tratamento desta infecção apresenta um grau de ineficácia que justifica a urgência na obtenção de novos fármacos. Recentemente, ensaios num sistema in vitro permitiram estabelecer a associação entre a eficiência da replicação do RNA genómico do VHC-1b e a expressão do microRNA miR-122, o miR mais abundante do tecido hepático e cuja expressão elevada é específica do fígado. Esta observação trouxe uma nova perspectiva à pesquisa de estratégias no tratamento da Hepatite Crónica C. O presente trabalho descreve o estudo desenvolvido para averiguação de uma possível correlação entre a expressão genética do miR-122 no tecido hepático de doentes Hepatite Crónica C, e a virémia serológica do VHC-1b, entre outros parâmetros clínicos da doença. O nível de expressão do miR-122 foi comparado com o do miR-22, o segundo miR mais abundante no tecido hepático mas, cujo nível de expressão ubíquo no organismo não o caracteriza como sendo específico do fígado. A quantificação dos microRNAs foi realizada através de uma reacção de retrotranscrição seguida de polimerização em cadeia quantitativa (RT-qPCR) detectada em tempo real. O protocolo experimental foi concebido de novo, tendo sido necessário proceder à sua optimização, destacando-se os estudos de especificidade, sensibilidade, precisão, exactidão e robustez do RT-qPCR. A metodologia estabelecida foi aqui documentada de modo a ser aplicada em trabalhos futuros. Neste estudo, e contrariamente ao esperado, não foi observada correlação entre a expressão do miR-122 hepático e a virémia do VHC-1b (ρ=0,021; p=0,93). Contudo, verificou-se uma correlação positiva entre a expressão do miR-22 e a actividade necro-inflamatória no fígado (hepatite interface, ρ=0,624; p<0,01). Este resultado indicia um potencial papel do miR-22 na histopatologia da Hepatite Crónica C, tendo sido discutido um modelo explicativo da associação encontrada.
Autores principais:	Neves, Sofia Maria Sentieiro
Assunto:	Virologia Hepatite C Microbiologia molecular Teses de mestrado - 2010
Ano:	2010
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso aberto
Instituição associada:	Universidade de Lisboa
Idioma:	português
Origem:	Repositório da Universidade de Lisboa

Descrição
Resumo:	A infecção pelo Vírus da Hepatite C (VHC) atinge 200 milhões de pessoas em todo mundo. A maioria dos infectados VHC adquire uma infecção persistente no fígado que origina uma hepatite crónica. A Hepatite Crónica C pode levar a uma cirrose hepática, e consequentemente, conduzir à falha hepática ou ao hepatocarcinoma humano (HCC). Não existe vacina e a terapêutica disponível para o tratamento desta infecção apresenta um grau de ineficácia que justifica a urgência na obtenção de novos fármacos. Recentemente, ensaios num sistema in vitro permitiram estabelecer a associação entre a eficiência da replicação do RNA genómico do VHC-1b e a expressão do microRNA miR-122, o miR mais abundante do tecido hepático e cuja expressão elevada é específica do fígado. Esta observação trouxe uma nova perspectiva à pesquisa de estratégias no tratamento da Hepatite Crónica C. O presente trabalho descreve o estudo desenvolvido para averiguação de uma possível correlação entre a expressão genética do miR-122 no tecido hepático de doentes Hepatite Crónica C, e a virémia serológica do VHC-1b, entre outros parâmetros clínicos da doença. O nível de expressão do miR-122 foi comparado com o do miR-22, o segundo miR mais abundante no tecido hepático mas, cujo nível de expressão ubíquo no organismo não o caracteriza como sendo específico do fígado. A quantificação dos microRNAs foi realizada através de uma reacção de retrotranscrição seguida de polimerização em cadeia quantitativa (RT-qPCR) detectada em tempo real. O protocolo experimental foi concebido de novo, tendo sido necessário proceder à sua optimização, destacando-se os estudos de especificidade, sensibilidade, precisão, exactidão e robustez do RT-qPCR. A metodologia estabelecida foi aqui documentada de modo a ser aplicada em trabalhos futuros. Neste estudo, e contrariamente ao esperado, não foi observada correlação entre a expressão do miR-122 hepático e a virémia do VHC-1b (ρ=0,021; p=0,93). Contudo, verificou-se uma correlação positiva entre a expressão do miR-22 e a actividade necro-inflamatória no fígado (hepatite interface, ρ=0,624; p<0,01). Este resultado indicia um potencial papel do miR-22 na histopatologia da Hepatite Crónica C, tendo sido discutido um modelo explicativo da associação encontrada.