Publicação
Produção de voláteis por culturas de raízes transgénicas de Anethum graveolens:influência da regeneração e da capacidade de biotransformação
| Resumo: | Foram usadas culturas de raízes transgénicas (r.t.) de Anthum graveolens para testar a possibilidade de regeneração e para avaliar a influência da capacidade de biotransformação dos álcoois monoterpénicos, mentol e geraniol, no crescimento e produção de voláteis. A regeneração foi ensaiada em fotoperíodo, de 24h luz em jiffy pellets e de 16h luz em caixas de Petri com 20 ml de meio MS/2. Parte destas foi suplementada com higromicina B (2 mg.l-1, 5 mg.l-1 e 7 mg.l-1) ou ácido salicílico (0,3; 0,5 e 0,8 mM). Outras foram tratadas com radiação UV-C (30 min, 30+15 min, 30+2x15 min, 30+3x15 min), posteriormente à inoculação com extremidades de r.t. A influência da biotransformação foi analisada pela adição de substrato às culturas 15 dias após a inoculação, numa concentração de 25 mg.l-1. As culturas foram mantidas em meio SH, sob escuridão permanente a 24ºC, com agitação a 80 r.p.m. A avaliação do crescimento foi efectuada pelo método da desassimilação e pela medição do peso fresco e peso seco das raízes ao longo de 7 semanas. A componente volátil, extraída por destilaçãoextracção, foi analisada por CGL e CGL-EM. A regeneração não foi conseguida. As r.t. submetidas a fotoperíodo de 16h luz revelaram crescimento, reverdecimento e formação de tecido caloso. Estas respostas não foram observadas com a aplicação de higromicina B ou ácido salicílico nem com o ensaio em jiffy pellets. Estas condições parecem ser prejudiciais ao crescimento. A componente volátil constitutiva das r.t. de A. graveolens é composta, em mais de 50%, por falcarinol (9- 52%), apiole (9-24%), ácido palmítico (7-16%), ácido linoleico (4-9%), miristicina (2-8%) e n-octanal (2-8%). A adição de mentol ou geraniol não influenciou substancialmente o crescimento. Após a adição, a proporção relativa de mentol decresceu rapidamente num período de 48h e observou-se a concomitante produção de acetato de mentilo. O geraniol adicionado foi biotransformado em, pelo menos, 10 produtos, os álcoois linalol, α-terpineol e citronelol, os aldeídos neral e geranial, os ésteres acetato de citronelilo, de nerilo e de geranilo e os óxidos de nerol e linalol. A proporção relativa de geraniol decresceu rapidamente num período de 48h em detrimento dos produtos. A concentração relativa de todos os produtos de biotransformação detectados diminuiu gradualmente ao longo do tempo de cultura |
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| Autores principais: | Faria, Jorge Miguel Silva |
| Assunto: | Biotecnologia Transgénicos Teses de mestrado |
| Ano: | 2008 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | Foram usadas culturas de raízes transgénicas (r.t.) de Anthum graveolens para testar a possibilidade de regeneração e para avaliar a influência da capacidade de biotransformação dos álcoois monoterpénicos, mentol e geraniol, no crescimento e produção de voláteis. A regeneração foi ensaiada em fotoperíodo, de 24h luz em jiffy pellets e de 16h luz em caixas de Petri com 20 ml de meio MS/2. Parte destas foi suplementada com higromicina B (2 mg.l-1, 5 mg.l-1 e 7 mg.l-1) ou ácido salicílico (0,3; 0,5 e 0,8 mM). Outras foram tratadas com radiação UV-C (30 min, 30+15 min, 30+2x15 min, 30+3x15 min), posteriormente à inoculação com extremidades de r.t. A influência da biotransformação foi analisada pela adição de substrato às culturas 15 dias após a inoculação, numa concentração de 25 mg.l-1. As culturas foram mantidas em meio SH, sob escuridão permanente a 24ºC, com agitação a 80 r.p.m. A avaliação do crescimento foi efectuada pelo método da desassimilação e pela medição do peso fresco e peso seco das raízes ao longo de 7 semanas. A componente volátil, extraída por destilaçãoextracção, foi analisada por CGL e CGL-EM. A regeneração não foi conseguida. As r.t. submetidas a fotoperíodo de 16h luz revelaram crescimento, reverdecimento e formação de tecido caloso. Estas respostas não foram observadas com a aplicação de higromicina B ou ácido salicílico nem com o ensaio em jiffy pellets. Estas condições parecem ser prejudiciais ao crescimento. A componente volátil constitutiva das r.t. de A. graveolens é composta, em mais de 50%, por falcarinol (9- 52%), apiole (9-24%), ácido palmítico (7-16%), ácido linoleico (4-9%), miristicina (2-8%) e n-octanal (2-8%). A adição de mentol ou geraniol não influenciou substancialmente o crescimento. Após a adição, a proporção relativa de mentol decresceu rapidamente num período de 48h e observou-se a concomitante produção de acetato de mentilo. O geraniol adicionado foi biotransformado em, pelo menos, 10 produtos, os álcoois linalol, α-terpineol e citronelol, os aldeídos neral e geranial, os ésteres acetato de citronelilo, de nerilo e de geranilo e os óxidos de nerol e linalol. A proporção relativa de geraniol decresceu rapidamente num período de 48h em detrimento dos produtos. A concentração relativa de todos os produtos de biotransformação detectados diminuiu gradualmente ao longo do tempo de cultura |
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