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Efeito de flavonóides na captação de HOCI produzido por neutrófilos activados e modulação do factor de transcrição NF-kB em células THP -1: análise da relação estrutura - actividade

Detalhes bibliográficos
Resumo:	Apesar das doenças inflamatórias estarem na base de diversas patologias, ainda não foiencontrada uma terapia adequada e universal para o tratamento das mesmas. As terapias anti-inflamatórias esteroides e não-esteróides tradicionais, ainda, não respondem eficazmente ou têm muitos efeitos colaterais associados. O ácido hipocloroso (HOCl) é um oxidante forte produzido por neutrófilos e monócitos activados e desde há muito tempo que lhe é reconhecido um papel fundamental no processo inflamatório. Embora a formação de HOCltenha como finalidade matar os microrganismos invasores dentro do fagossoma, pode serlibertado para fora da célula e levar à lesão dos tecidos contribuindo, deste modo, para apatogénese de doenças inflamatórias. Considerou-se, por isso, importante estudar aspropriedades anti-inflamatórias de alguns flavonóides, em relação à captação de HOCl gerado por neutrófilos activados ex vivo, bem como os seus efeitos na activação do factor de transcrição NF-κB.Em relação à captação de HOCl, para cada flavonóide foram determinados valores de IC50,através de diferentes métodos de competição: cloração da taurina e oxidação da sonda 3-aminofenilfluoresceína (APF), que foi seguida por espectrofluorimetria e citometria de fluxo. A miricetina e a quercetina apresentaram uma elevada actividade antioxidante com valores de IC50 semelhantes, apresentando características estruturais semelhantes que lhe permite ter um efeito protector em relação às reacções mediadas pelo HOCl. Estudou-se, também, a capacidade dos flavonóides induzirem variações na activação do NF-κBem células monocíticas THP-1 activadas por LPS por duas técnicas. Na transfecção com um plasmideo, acoplado ao gene repórter-kB, com uma sequência com elevada afinidade para o NF-kB e estimulação com LPS, observou-se uma elevada activação do promotor do NF-kB. No entanto, a presença de flavonóides (miricetina, canferol e isorrametina) leva a uma dimimuição da activação do promotor. De acordo com estes resultados observou-se, através da análise por western blot, uma diminuição da migração nuclear do p65-NF-kB, na presença de quercetina e miricetina. Estes resultados sugerem que os flavonóides estudados podem exercer efeitos antiinflamatórios, através da captação de HOCl e da inibição da activação do NF-κB.
Autores principais:	Garcia, Vanessa Sílvia Gomes
Assunto:	Inflamação Flavonóides HOCI Neutrófilos Células THP-1 Células NF-kB Teses de mestrado - 2010
Ano:	2010
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso aberto
Instituição associada:	Universidade de Lisboa
Idioma:	português
Origem:	Repositório da Universidade de Lisboa

Descrição
Resumo:	Apesar das doenças inflamatórias estarem na base de diversas patologias, ainda não foiencontrada uma terapia adequada e universal para o tratamento das mesmas. As terapias anti-inflamatórias esteroides e não-esteróides tradicionais, ainda, não respondem eficazmente ou têm muitos efeitos colaterais associados. O ácido hipocloroso (HOCl) é um oxidante forte produzido por neutrófilos e monócitos activados e desde há muito tempo que lhe é reconhecido um papel fundamental no processo inflamatório. Embora a formação de HOCltenha como finalidade matar os microrganismos invasores dentro do fagossoma, pode serlibertado para fora da célula e levar à lesão dos tecidos contribuindo, deste modo, para apatogénese de doenças inflamatórias. Considerou-se, por isso, importante estudar aspropriedades anti-inflamatórias de alguns flavonóides, em relação à captação de HOCl gerado por neutrófilos activados ex vivo, bem como os seus efeitos na activação do factor de transcrição NF-κB.Em relação à captação de HOCl, para cada flavonóide foram determinados valores de IC50,através de diferentes métodos de competição: cloração da taurina e oxidação da sonda 3-aminofenilfluoresceína (APF), que foi seguida por espectrofluorimetria e citometria de fluxo. A miricetina e a quercetina apresentaram uma elevada actividade antioxidante com valores de IC50 semelhantes, apresentando características estruturais semelhantes que lhe permite ter um efeito protector em relação às reacções mediadas pelo HOCl. Estudou-se, também, a capacidade dos flavonóides induzirem variações na activação do NF-κBem células monocíticas THP-1 activadas por LPS por duas técnicas. Na transfecção com um plasmideo, acoplado ao gene repórter-kB, com uma sequência com elevada afinidade para o NF-kB e estimulação com LPS, observou-se uma elevada activação do promotor do NF-kB. No entanto, a presença de flavonóides (miricetina, canferol e isorrametina) leva a uma dimimuição da activação do promotor. De acordo com estes resultados observou-se, através da análise por western blot, uma diminuição da migração nuclear do p65-NF-kB, na presença de quercetina e miricetina. Estes resultados sugerem que os flavonóides estudados podem exercer efeitos antiinflamatórios, através da captação de HOCl e da inibição da activação do NF-κB.