Publicação
Deteção de vírus em matrizes alimentares
| Resumo: | A segurança alimentar está relacionada com a presença de perigos em géneros alimentícios no momento do seu consumo. A entrada desses elementos perigosos que podem constituir um risco quando ingeridos em conjunto com o alimento contaminado pode ocorrer em qualquer etapa da cadeia de produção de alimentos, tornando-se essencial a sua conveniente identificação. Os perigos biológicos de origem alimentar incluem microrganismos como fungos, bactérias e vírus. Os vírus são parasitas intracelulares obrigatórios que contêm um genoma de RNA ou de DNA associado a uma capa proteica protetora. Apenas se conseguem multiplicar no interior das células vivas dos seus organismos hospedeiros após infeção. A contaminação de alimentos por vírus pode ocorrer ao longo de toda a cadeia de produção, quer devido ao uso de más práticas de saneamento ou à intervenção de manipuladores de alimentos infetados. Entre os alimentos com maior risco de contaminação por vírus entéricos estão os moluscos bivalves, devido à sua elevada capacidade de filtrar e concentrar os vírus que podem estar presentes na água, os vegetais, legumes, frutos vermelhos e bagas cultivados em campos fertilizados com resíduos de origem animal ou irrigados com águas contaminadas. Nestes alimentos contaminados, os vírus estão geralmente presentes em baixas concentrações e as metodologias de deteção convencionais, tais como a propagação em células animais, nem sempre permitem a sua deteção. Para além do mais, nem sempre existem métodos de rotina para a propagação de certos vírus. A sua deteção passa, portanto, pela utilização de técnicas moleculares após as necessárias etapas de extração de partículas virais da matriz em questão e subsequente extração de ácidos nucleicos virais. A presente dissertação de mestrado teve como principal objetivo o desenvolvimento de novos métodos e a adaptação e otimização de métodos previamente descritos para a deteção de vírus em diferentes matrizes alimentares relevantes. Este trabalho permitiu definir métodos específicos de deteção de norovírus GI, norovírus GII, vírus da hepatite A, e adenovírus humanos (HAdV) por RT-PCR e PCR em tempo real. Para os métodos desenvolvidos foi determinado o limite de deteção (LOD), a especificidade e a reprodutibilidade em diferentes termocicladores. Este trabalho permitiu igualmente otimizar o processo de extração de ácidos nucleicos virais após a extração de partículas virais de diferentes vírus a partir das seguintes matrizes alimentares selecionadas: moluscos bivalves, frutos vermelhos e águas engarrafadas. Os métodos desenvolvidos estão prontos para serem usados numa empresa sob a forma de kit ou serviço. Em paralelo, este trabalho permitiu igualmente o desenvolvimento de um método de PCR digital que permite a deteção e quantificação em simultâneo de 69 serótipos de HAdV descritos. |
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| Autores principais: | Paixão, Diana Rita Santos |
| Assunto: | Teses de mestrado - 2016 |
| Ano: | 2016 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | A segurança alimentar está relacionada com a presença de perigos em géneros alimentícios no momento do seu consumo. A entrada desses elementos perigosos que podem constituir um risco quando ingeridos em conjunto com o alimento contaminado pode ocorrer em qualquer etapa da cadeia de produção de alimentos, tornando-se essencial a sua conveniente identificação. Os perigos biológicos de origem alimentar incluem microrganismos como fungos, bactérias e vírus. Os vírus são parasitas intracelulares obrigatórios que contêm um genoma de RNA ou de DNA associado a uma capa proteica protetora. Apenas se conseguem multiplicar no interior das células vivas dos seus organismos hospedeiros após infeção. A contaminação de alimentos por vírus pode ocorrer ao longo de toda a cadeia de produção, quer devido ao uso de más práticas de saneamento ou à intervenção de manipuladores de alimentos infetados. Entre os alimentos com maior risco de contaminação por vírus entéricos estão os moluscos bivalves, devido à sua elevada capacidade de filtrar e concentrar os vírus que podem estar presentes na água, os vegetais, legumes, frutos vermelhos e bagas cultivados em campos fertilizados com resíduos de origem animal ou irrigados com águas contaminadas. Nestes alimentos contaminados, os vírus estão geralmente presentes em baixas concentrações e as metodologias de deteção convencionais, tais como a propagação em células animais, nem sempre permitem a sua deteção. Para além do mais, nem sempre existem métodos de rotina para a propagação de certos vírus. A sua deteção passa, portanto, pela utilização de técnicas moleculares após as necessárias etapas de extração de partículas virais da matriz em questão e subsequente extração de ácidos nucleicos virais. A presente dissertação de mestrado teve como principal objetivo o desenvolvimento de novos métodos e a adaptação e otimização de métodos previamente descritos para a deteção de vírus em diferentes matrizes alimentares relevantes. Este trabalho permitiu definir métodos específicos de deteção de norovírus GI, norovírus GII, vírus da hepatite A, e adenovírus humanos (HAdV) por RT-PCR e PCR em tempo real. Para os métodos desenvolvidos foi determinado o limite de deteção (LOD), a especificidade e a reprodutibilidade em diferentes termocicladores. Este trabalho permitiu igualmente otimizar o processo de extração de ácidos nucleicos virais após a extração de partículas virais de diferentes vírus a partir das seguintes matrizes alimentares selecionadas: moluscos bivalves, frutos vermelhos e águas engarrafadas. Os métodos desenvolvidos estão prontos para serem usados numa empresa sob a forma de kit ou serviço. Em paralelo, este trabalho permitiu igualmente o desenvolvimento de um método de PCR digital que permite a deteção e quantificação em simultâneo de 69 serótipos de HAdV descritos. |
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