Publicação
Detecção do vírus do papiloma humano por PCR em tempo real : relevância para medicina legal
| Resumo: | Introdução: O presente estudo visa demonstrar a importância das técnicas in house com relevância para o PCR em tempo real, na detecção e genotipagem do VPH e o seu contributo na Medicina Legal (ML). As infecções mais comuns em vítimas de violência sexual são a clamídea, gonorreia, sífilis e trichomonas, existindo igualmente o risco de contrair infecções virais, nas quais se destaca a infecção pelo VPH. Esta apresenta uma elevada infecciosidade com impacto ao nível da prevalência na população em geral. As infecções sexualmente transmissíveis (IST) em contexto ML são indicadores biológicos nos casos de abuso evidente ou declarados e a manifestação da infecção em crianças, idades não sexualmente activas, pode ser sugestiva quanto ao modo de transmissão ocorrido. A detecção do ADN viral e identificação do genótipo específico poderá contribuir no esclarecimento de situações com potenciais implicações sócio-médico-legais. Objectivo: Implementação, optimização e validação de um ensaio de PCR em Tempo Real para a detecção qualitativa do VPH (rastreio) em amostras biológicas (esfregaços e biópsias) do colo. Demonstrar o desempenho do ensaio face aos critérios estabelecidos, tendo em conta normas científicas e o estado arte. Possibilitar a identificação do genótipo da amostra positiva para o ADN do VPH. Metodologia: O desenho do ensaio conteve diferentes etapas de preparação: Extracção do ADN, adaptação das condições de PCR e interpretação analítica do resultado produzido (positivo ou negativo). Implementação do programa de monitorização e controlo da qualidade pela caracterização do método de ensaio nas suas variáveis de sensibilidade e especificidade analítica. Determinação dos valores preditivos positivo e negativo numa população específica analisada. Resultados: O ensaio desenvolvido permite a detecção de cerca de 30 genótipos diferentes do vírus do papiloma humano com limite de detecção 5 UI/ml para os genótipos mais prevalentes VPH16 e VPH18. O desempenho do ensaio quanto à sua sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo, foi calculada para situações de lesões maiores ou iguais a CIN 2+ (Classificação Bethsheda) onde a melhor estimativa, foi de 85.6%, 58.1%, 33.7% e 94.2%, respectivamente. Conclusões: A metodologia de ensaio laboratorial desenvolvida proporciona robustez, fiabilidade e exactidão no resultado que produz. Disponibiliza inovação (tecnologia e económica) face as técnicas comerciais existentes na detecção deste vírus e constitui uma mais-valia contexto ML. |
|---|---|
| Autores principais: | Sousa, Daniela Cochicho Tavares de, 1980- |
| Assunto: | PCR em tempo real Vírus do papiloma humano (VPH) Medicina legal Teses de mestrado - 2014 |
| Ano: | 2014 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | Introdução: O presente estudo visa demonstrar a importância das técnicas in house com relevância para o PCR em tempo real, na detecção e genotipagem do VPH e o seu contributo na Medicina Legal (ML). As infecções mais comuns em vítimas de violência sexual são a clamídea, gonorreia, sífilis e trichomonas, existindo igualmente o risco de contrair infecções virais, nas quais se destaca a infecção pelo VPH. Esta apresenta uma elevada infecciosidade com impacto ao nível da prevalência na população em geral. As infecções sexualmente transmissíveis (IST) em contexto ML são indicadores biológicos nos casos de abuso evidente ou declarados e a manifestação da infecção em crianças, idades não sexualmente activas, pode ser sugestiva quanto ao modo de transmissão ocorrido. A detecção do ADN viral e identificação do genótipo específico poderá contribuir no esclarecimento de situações com potenciais implicações sócio-médico-legais. Objectivo: Implementação, optimização e validação de um ensaio de PCR em Tempo Real para a detecção qualitativa do VPH (rastreio) em amostras biológicas (esfregaços e biópsias) do colo. Demonstrar o desempenho do ensaio face aos critérios estabelecidos, tendo em conta normas científicas e o estado arte. Possibilitar a identificação do genótipo da amostra positiva para o ADN do VPH. Metodologia: O desenho do ensaio conteve diferentes etapas de preparação: Extracção do ADN, adaptação das condições de PCR e interpretação analítica do resultado produzido (positivo ou negativo). Implementação do programa de monitorização e controlo da qualidade pela caracterização do método de ensaio nas suas variáveis de sensibilidade e especificidade analítica. Determinação dos valores preditivos positivo e negativo numa população específica analisada. Resultados: O ensaio desenvolvido permite a detecção de cerca de 30 genótipos diferentes do vírus do papiloma humano com limite de detecção 5 UI/ml para os genótipos mais prevalentes VPH16 e VPH18. O desempenho do ensaio quanto à sua sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo, foi calculada para situações de lesões maiores ou iguais a CIN 2+ (Classificação Bethsheda) onde a melhor estimativa, foi de 85.6%, 58.1%, 33.7% e 94.2%, respectivamente. Conclusões: A metodologia de ensaio laboratorial desenvolvida proporciona robustez, fiabilidade e exactidão no resultado que produz. Disponibiliza inovação (tecnologia e económica) face as técnicas comerciais existentes na detecção deste vírus e constitui uma mais-valia contexto ML. |
|---|