Publicação
Inibição de cinases e/ou fosfatases celulares por bibliotecas de siRNA:aplicação na infecção do HIV-1
| Resumo: | O mecanismo de reparação do DNA após a integração do HIV-1 ainda não foi esclarecido. A cinase dependente de DNA (DNA-PK) já foi descrita como podendo desempenhar um papel importante na integração, contudo existem estudos que contestam tal afirmação. Este trabalho tem como objectivo esclarecer o papel da DNA-PK na replicação do HIV-1. Neste sentido, criaram-se clones onde a subunidade catalítica da DNA-PK (DNA-PKcs) é silenciada pela expressão estável de shRNAs. O nível de silenciamento da DNA-PKcs foi avaliado por Western Blot, verificando-se uma diminuição acentuada dos níveis de expressão de DNA-PKcs para todos os clones. Através destes clones pretendeu avaliar-se a importância da DNA-PKcs para a replicação do HIV-1. Para tal, infectaram-se os clones com HIV-1 e determinou-se a sua resistência à infecção ao fim de sete dias. Todos os clones demonstraram uma inibição quase total de produção de partículas virais e da proteína da cápside (p24), demostrando que a DNA-PKcs é importante para o ciclo de replicação do HIV-1. Uma vez que a DNA-PKcs tem um papel importante na reparação de danos de DNA de cadeia dupla (DSBs), foi avaliado se a infecção com HIV-1 leva à formação de DSBs e se a DNA-PKcs está envolvida na sua reparação. Demonstrou-se que a infecção de HIV-1 leva à fomação de DSBs. Obtiveram-se alguns dados preliminares onde a formação das DSBs devido à infecção com HIV-1 não é tão evidente nos clones que expressam shRNAs contra DNA-PKcs, sugerindo que o papel da DNA-PKcs poderá não ser importante ao nível da reparação das DSBs provocadas pela infecção do HIV-1. O esclarecimento do papel que a DNA-PKcs desempenha na replicação do HIV-1 levará a um maior conhecimento acerca da dinâmica entre o vírus e o hospedeiro, o que poderá levar à descoberta de novos alvos terapêuticos eficazes |
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| Autores principais: | Resende, Leonor Marques |
| Assunto: | Biologia molecular HIV Teses de mestrado |
| Ano: | 2008 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | O mecanismo de reparação do DNA após a integração do HIV-1 ainda não foi esclarecido. A cinase dependente de DNA (DNA-PK) já foi descrita como podendo desempenhar um papel importante na integração, contudo existem estudos que contestam tal afirmação. Este trabalho tem como objectivo esclarecer o papel da DNA-PK na replicação do HIV-1. Neste sentido, criaram-se clones onde a subunidade catalítica da DNA-PK (DNA-PKcs) é silenciada pela expressão estável de shRNAs. O nível de silenciamento da DNA-PKcs foi avaliado por Western Blot, verificando-se uma diminuição acentuada dos níveis de expressão de DNA-PKcs para todos os clones. Através destes clones pretendeu avaliar-se a importância da DNA-PKcs para a replicação do HIV-1. Para tal, infectaram-se os clones com HIV-1 e determinou-se a sua resistência à infecção ao fim de sete dias. Todos os clones demonstraram uma inibição quase total de produção de partículas virais e da proteína da cápside (p24), demostrando que a DNA-PKcs é importante para o ciclo de replicação do HIV-1. Uma vez que a DNA-PKcs tem um papel importante na reparação de danos de DNA de cadeia dupla (DSBs), foi avaliado se a infecção com HIV-1 leva à formação de DSBs e se a DNA-PKcs está envolvida na sua reparação. Demonstrou-se que a infecção de HIV-1 leva à fomação de DSBs. Obtiveram-se alguns dados preliminares onde a formação das DSBs devido à infecção com HIV-1 não é tão evidente nos clones que expressam shRNAs contra DNA-PKcs, sugerindo que o papel da DNA-PKcs poderá não ser importante ao nível da reparação das DSBs provocadas pela infecção do HIV-1. O esclarecimento do papel que a DNA-PKcs desempenha na replicação do HIV-1 levará a um maior conhecimento acerca da dinâmica entre o vírus e o hospedeiro, o que poderá levar à descoberta de novos alvos terapêuticos eficazes |
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