Publicação
Caracterização do sintase do óxido nítrico de Leishmania infantum
| Resumo: | O óxido nítrico (NO) desempenha um papel fundamental nos processos de sinalização e infecção por parasitas, tais como tripanossomatídeos. É produzido por uma família de enzimas designados por sintases do óxido nítrico (NOS). Estudos prévios indicam que existe produção de NO em várias espécies de Leishmania, mas nunca foi demonstrada a existência do enzima NOS nem do gene que o codifica nestes organismos. O presente trabalho permitiu identificar um gene que codifica para um NOS de Leishmania infantum, tendo-se expressado a proteína recombinante em bactérias E. coli e optimizado o processo de purificação desta proteína de 64 kDa. A sua actividade enzimática depende de vários cofactores de NOS conhecidos, como FAD, FMN, tetrahidrobiopterina (BH4), calmodulina e cálcio. A tetrahidrobiopterina, uma molécula importante no processo de infecção por Leishmania, modula a actividade do LiNOS de uma forma cooperativa. Determinou-se que o Km para o substrato deste enzima é de 0,9 μM, quando este é pré-incubado com BH4, e que este possui uma actividade específica de 3,8 nmol.min-1.mg-1, sendo a constante catalítica de 4,1 x 10-3 s-1. A expressão do LiNOS em promastigotas foi confirmada por peptide mass fingerprint, mostrando que este enzima deverá ser importante para o ciclo celular do parasita. Este é o primeiro gene NOS e enzima NOS identificados e caracterizados num tripanossomatídeo. Uma vez que os genes NOS de tripanossomatídeos não apresentam semelhanças significativas com os genes NOS de humanos, os enzimas NOS de tripanossomatídeos podem tornar-se possíveis alvos terapêuticos. |
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| Autores principais: | Silva, Filipa Simplício da |
| Assunto: | Sintase do óxido nítrico (NOS) Óxido nítrico (NO) Leishmania infantum Leishmaniose visceral (VL) LiNOS Tetrahidrobiopterina (BH4) |
| Ano: | 2010 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | O óxido nítrico (NO) desempenha um papel fundamental nos processos de sinalização e infecção por parasitas, tais como tripanossomatídeos. É produzido por uma família de enzimas designados por sintases do óxido nítrico (NOS). Estudos prévios indicam que existe produção de NO em várias espécies de Leishmania, mas nunca foi demonstrada a existência do enzima NOS nem do gene que o codifica nestes organismos. O presente trabalho permitiu identificar um gene que codifica para um NOS de Leishmania infantum, tendo-se expressado a proteína recombinante em bactérias E. coli e optimizado o processo de purificação desta proteína de 64 kDa. A sua actividade enzimática depende de vários cofactores de NOS conhecidos, como FAD, FMN, tetrahidrobiopterina (BH4), calmodulina e cálcio. A tetrahidrobiopterina, uma molécula importante no processo de infecção por Leishmania, modula a actividade do LiNOS de uma forma cooperativa. Determinou-se que o Km para o substrato deste enzima é de 0,9 μM, quando este é pré-incubado com BH4, e que este possui uma actividade específica de 3,8 nmol.min-1.mg-1, sendo a constante catalítica de 4,1 x 10-3 s-1. A expressão do LiNOS em promastigotas foi confirmada por peptide mass fingerprint, mostrando que este enzima deverá ser importante para o ciclo celular do parasita. Este é o primeiro gene NOS e enzima NOS identificados e caracterizados num tripanossomatídeo. Uma vez que os genes NOS de tripanossomatídeos não apresentam semelhanças significativas com os genes NOS de humanos, os enzimas NOS de tripanossomatídeos podem tornar-se possíveis alvos terapêuticos. |
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