Publicação
Avaliação do papel dos vários tipos de células do SNC na lesão de isquemia-reperfusão associado ao AVC
| Resumo: | A isquemia cerebral caracteriza-se pela obstrução de um vaso sanguíneo que irriga o cérebro, resultando num processo inflamatório que conduz a neurodegeneração. Após o evento isquémico as células gliais são gradualmente ativadas, desempenhando um papel importante primeiro na contenção do dano, mas posteriormente no agravamento da patologia, através da libertação de mediadores pró-inflamatórios e anti-inflamatórios. O acidente vascular cerebral (AVC) é uma doença com a capacidade de provocar danos neurológicos irreversíveis e, como tal, torna-se necessário investigar terapêuticas adequadas para a redução das complicações neurológicas, uma vez que a única terapêutica farmacológica direcionada para abordagem de doentes com AVC isquémico (administração de trombolíticos) apresenta muitas limitações. Este trabalho surge com o objetivo de estudar as alterações e comportamentos que ocorrem nas células do sistema nervoso central (SNC) durante as diferentes fases de isquemia-reperfusão, contribuindo para uma melhor compreensão fisiopatológica desta condição, assim como também descobrir potenciais novos alvos terapêuticos. O modelo de oclusão da artéria cerebral média foi desenvolvido em 8 ratos, divididos aleatoriamente por dois grupos: o grupo de isquemia de 1 hora (I 1h) e o grupo de isquemia-reperfusão de 1 hora (I/R 1h). Posteriormente, os cérebros dos animais foram utilizados para determinar a expressão de marcadores de microglia (Iba1, iNOS, Arg) e astrócitos (GFAP, S100B); mediadores inflamatórios (TNF-α, IL-1β, IL-10); proteínas de sinalização específicas (Akt, GSK-3β); e proteínas sinápticas (PSD-95, Syn) utilizando os métodos de Western Blot e qRealTime-PCR. Os nossos resultados sugerem que o TNF-α é mais expresso no grupo I/R 1h (~ 3,5 fold), enquanto os ratos dos dois grupos mostram níveis diminuídos de IL-10 no hemisfério afetado (~ 0,2 fold – I 1h; ~ 0,4 fold - I/R 1h), significando que a inflamação está presente e pode desempenhar um papel relevante na lesão cerebral. Além disso, houve uma diminuição semelhante na expressão génica de PSD-95 e Syn em ambos os grupos (~ 0,5 fold), sugerindo uma rápida lesão sináptica após o período de isquemia. Houve também uma tendência de perda de células da micróglia no hemisfério lesado, conforme observado pela expressão reduzida de Iba1 no grupo I/R 1h (~ 0,4 fold), enquanto para os astrócitos houve um aumento da expressão de GFAP no hemisfério contralateral, no grupo I/R (~ 1,6 fold), sugerindo o recrutamento destas células para auxiliar a região afetada pelo tempo de isquemia. Apesar destes resultados, é necessário investigar o que acontece aos parâmetros estudados noutras janelas de tempo, tentando encontrar novas abordagens terapêuticas direcionadas ao processo inflamatório para redução da lesão cerebral causada pela isquemia-reperfusão. |
|---|---|
| Autores principais: | Santos, Sofia Lousada dos |
| Assunto: | AVC Isquemia Reperfusão OACM Inflamação Células gliais Teses de mestrado -2021 |
| Ano: | 2021 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | A isquemia cerebral caracteriza-se pela obstrução de um vaso sanguíneo que irriga o cérebro, resultando num processo inflamatório que conduz a neurodegeneração. Após o evento isquémico as células gliais são gradualmente ativadas, desempenhando um papel importante primeiro na contenção do dano, mas posteriormente no agravamento da patologia, através da libertação de mediadores pró-inflamatórios e anti-inflamatórios. O acidente vascular cerebral (AVC) é uma doença com a capacidade de provocar danos neurológicos irreversíveis e, como tal, torna-se necessário investigar terapêuticas adequadas para a redução das complicações neurológicas, uma vez que a única terapêutica farmacológica direcionada para abordagem de doentes com AVC isquémico (administração de trombolíticos) apresenta muitas limitações. Este trabalho surge com o objetivo de estudar as alterações e comportamentos que ocorrem nas células do sistema nervoso central (SNC) durante as diferentes fases de isquemia-reperfusão, contribuindo para uma melhor compreensão fisiopatológica desta condição, assim como também descobrir potenciais novos alvos terapêuticos. O modelo de oclusão da artéria cerebral média foi desenvolvido em 8 ratos, divididos aleatoriamente por dois grupos: o grupo de isquemia de 1 hora (I 1h) e o grupo de isquemia-reperfusão de 1 hora (I/R 1h). Posteriormente, os cérebros dos animais foram utilizados para determinar a expressão de marcadores de microglia (Iba1, iNOS, Arg) e astrócitos (GFAP, S100B); mediadores inflamatórios (TNF-α, IL-1β, IL-10); proteínas de sinalização específicas (Akt, GSK-3β); e proteínas sinápticas (PSD-95, Syn) utilizando os métodos de Western Blot e qRealTime-PCR. Os nossos resultados sugerem que o TNF-α é mais expresso no grupo I/R 1h (~ 3,5 fold), enquanto os ratos dos dois grupos mostram níveis diminuídos de IL-10 no hemisfério afetado (~ 0,2 fold – I 1h; ~ 0,4 fold - I/R 1h), significando que a inflamação está presente e pode desempenhar um papel relevante na lesão cerebral. Além disso, houve uma diminuição semelhante na expressão génica de PSD-95 e Syn em ambos os grupos (~ 0,5 fold), sugerindo uma rápida lesão sináptica após o período de isquemia. Houve também uma tendência de perda de células da micróglia no hemisfério lesado, conforme observado pela expressão reduzida de Iba1 no grupo I/R 1h (~ 0,4 fold), enquanto para os astrócitos houve um aumento da expressão de GFAP no hemisfério contralateral, no grupo I/R (~ 1,6 fold), sugerindo o recrutamento destas células para auxiliar a região afetada pelo tempo de isquemia. Apesar destes resultados, é necessário investigar o que acontece aos parâmetros estudados noutras janelas de tempo, tentando encontrar novas abordagens terapêuticas direcionadas ao processo inflamatório para redução da lesão cerebral causada pela isquemia-reperfusão. |
|---|