Publicação
Construction of glucocorticoid receptor minigene to study alternative splicing mechanism : the role of dehydroepiandrosterone on the receptor for activated C kinase-1 expression
| Resumo: | Os glucocorticóides são um grupo farmacoterapêutico bastante utilizado no tratamento de diversas patologias inflamatórias agudas e crónicas, incluindo alergias graves e doenças do foro dermatológico, asma, patologias auto-imunes, transplante de órgãos e alguns tipos de cancro. É frequente o desenvolvimento de resistência à terapêutica com glucocorticóides após a sua administração durante longos períodos de tempo e, principalmente, como consequência do declínio na eficácia da resposta imunológica com o avanço da idade, um processo denominado imunosenescência. Compreender os mecanismos moleculares que podem estar na origem da resistência aos glucocorticóides proporciona o desenvolvimento de novos tratamentos que podem melhorar os regimes da corticoterapia. Com o desenvolvimento da imunosenescência, alterações na via de transdução de sinal da proteína cinase C, muito relevante no sucesso da resposta imunitária, têm vindo a ser reconhecidas. Nos últimos anos, tem vindo a ser amplamente estudado o mecanismo de ação dos glucocorticóides no receptor activado para a cinase C1, que tem um papel relevante em muitas vias imunológicas, bem como no processo da patologia oncológica. Caracterizou-se a região do promotor humano de RACK-1 identificando-se o elemento de resposta ao glucocorticóide. Após ter sido demonstrado que o cortisol tem a capacidade de regular negativamente a expressão de RACK-1 através da sua ação sobre o receptor glucocorticóide; verificou-se que a exposição prolongada a DHEA poderá contrariar este efeito restaurando assim os níveis da proteína RACK-1 e a produção de citocinas. Em particular, DHEA modula o efeito do cortisol na expressão de RACK-1 através da sua interferência particular no processo de splicing aquando da síntese do receptor glucocorticóide. Verifica-se também que o tratamento com DHEA induz um aumento da regulação da isoforma GRβ dose-dependente, sem afetar a expressão da isoforma GRα. Há um aumento significativo da razão GRβ/GRα nas células pré-tratadas com DHEA e, posteriormente, com cortisol, quando em comparação com as células tratadas apenas com cortisol. É importante a compreensão da via de transdução de sinal PKC/RACK-1 no contexto da imunosenescência e o estudo do mecanismo de splicing alternativo do receptor glucocorticóide. Este projeto pretende contribuir para uma melhor compreensão do mecanismo de ação de DHEA e do seu efeito anti-glucocorticóide sobre o sistema imunitário. Considerando que DHEA influencia a expressão de alguns factores de proteínas de splicing, os principais reguladores do splicing alternativo do GR, o principal objetivo do projeto é esclarecer o efeito de DHEA, através da construção do minigene representativo de GR. É também considerada a validação da construção do minigene como uma tecnologia efetiva para o estudo deste mecanismo molecular no âmbito da farmacologia aplicada. |
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| Autores principais: | Antunes, Joana Filipa Mendes |
| Assunto: | Imunosenescência Terapêutica glucocorticóide Mecanismo de splicing alternativo Receptor glucocorticóide β Desidroepiandrosterona Expressão de RACK-1 Mestrado Integrado - 2016 |
| Ano: | 2016 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso restrito |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | inglês |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | Os glucocorticóides são um grupo farmacoterapêutico bastante utilizado no tratamento de diversas patologias inflamatórias agudas e crónicas, incluindo alergias graves e doenças do foro dermatológico, asma, patologias auto-imunes, transplante de órgãos e alguns tipos de cancro. É frequente o desenvolvimento de resistência à terapêutica com glucocorticóides após a sua administração durante longos períodos de tempo e, principalmente, como consequência do declínio na eficácia da resposta imunológica com o avanço da idade, um processo denominado imunosenescência. Compreender os mecanismos moleculares que podem estar na origem da resistência aos glucocorticóides proporciona o desenvolvimento de novos tratamentos que podem melhorar os regimes da corticoterapia. Com o desenvolvimento da imunosenescência, alterações na via de transdução de sinal da proteína cinase C, muito relevante no sucesso da resposta imunitária, têm vindo a ser reconhecidas. Nos últimos anos, tem vindo a ser amplamente estudado o mecanismo de ação dos glucocorticóides no receptor activado para a cinase C1, que tem um papel relevante em muitas vias imunológicas, bem como no processo da patologia oncológica. Caracterizou-se a região do promotor humano de RACK-1 identificando-se o elemento de resposta ao glucocorticóide. Após ter sido demonstrado que o cortisol tem a capacidade de regular negativamente a expressão de RACK-1 através da sua ação sobre o receptor glucocorticóide; verificou-se que a exposição prolongada a DHEA poderá contrariar este efeito restaurando assim os níveis da proteína RACK-1 e a produção de citocinas. Em particular, DHEA modula o efeito do cortisol na expressão de RACK-1 através da sua interferência particular no processo de splicing aquando da síntese do receptor glucocorticóide. Verifica-se também que o tratamento com DHEA induz um aumento da regulação da isoforma GRβ dose-dependente, sem afetar a expressão da isoforma GRα. Há um aumento significativo da razão GRβ/GRα nas células pré-tratadas com DHEA e, posteriormente, com cortisol, quando em comparação com as células tratadas apenas com cortisol. É importante a compreensão da via de transdução de sinal PKC/RACK-1 no contexto da imunosenescência e o estudo do mecanismo de splicing alternativo do receptor glucocorticóide. Este projeto pretende contribuir para uma melhor compreensão do mecanismo de ação de DHEA e do seu efeito anti-glucocorticóide sobre o sistema imunitário. Considerando que DHEA influencia a expressão de alguns factores de proteínas de splicing, os principais reguladores do splicing alternativo do GR, o principal objetivo do projeto é esclarecer o efeito de DHEA, através da construção do minigene representativo de GR. É também considerada a validação da construção do minigene como uma tecnologia efetiva para o estudo deste mecanismo molecular no âmbito da farmacologia aplicada. |
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