Publicação

Caracterização de isolados de Aspergillus provenientes de ambiente hospitalar: identificação molecular e determinação dos padrões de susceptibilidade aos antifúngicos

Detalhes bibliográficos
Resumo:	Aspergillus sp. é um fungo potencialmente patogénico com elevada letalidade em doentes imunocomprometidos, nomeadamente transplantados e sob terapias imunossupressoras. Por se tratar de um fungo ambiental cosmopolita, a qualidade microbiológica do ambiente hospitalar que rodeia este tipo de doentes reveste-se de particular importância. Assim, este estudo teve como objetivo a deteção e caracterização de isolados de Aspergillus spp. em ambiente hospitalar. Para tal, foram analisadas 51 amostras ambientais (ar, superfície e substrato). O género fúngico mais frequentemente isolado foi Penicillium em 33% das amostras. Apesar de menos frequente, Aspergillus sp. foi isolado em 18% das amostras. O número de unidades formadoras de colónias variou entre 0 e 111 ufc/m3 no ar, 0 e 1000 ufc/m2 nas superfícies e 55 e 175 ufc/g na terra. Usando uma abordagem polifásica na identificação e apenas após aplicação de metodologias moleculares, verificou-se que 63% dos isolados eram espécies crípticas, sendo que a espécie críptica mais prevalente Aspergillus protuberus (27%), pertencente à secção de Aspergillus versicolor. Outro dos objetivos desta dissertação foi a caracterização dos padrões de susceptibilidade aos antifúngicos dos isolados de Aspergillus spp. recolhidos, para isso foram realizadas duas técnicas: meios screening (itraconazol e voriconazol) e microdiluições (anfotericina B, posaconazol e voriconazol). As metodologias mostraram elevada percentagem de concordância e apresentam-se como complementares. Não se detetaram resistências nos isolados pertencentes à secção Fumigati, enquanto os isolados da secção Versicolores foram aqueles que apresentaram valores mais elevados de concentrações mínimas inibitórias para diferentes antifúngicos. Através dos meios de screening foram ainda pesquisados isolados Aspergillus sp. resistentes aos azóis em exsudados nasais de trabalhadores de uma indústria corticeira. Foram detetados, em dois dos trabalhadores, três isolados de Aspergillus sp. com susceptibilidade reduzida ao itraconazol, dois deles pertencentes à secção Niger e um à secção Fumigati. A confirmação desta redução na susceptibilidade ao itraconazol não foi possível efectuar pelo método de referência. A otimização de um PCR específico usando o primer cyp51A permitiu desenvolver uma metodologia de PCR em tempo real com elevada sensibilidade e que permite a deteção rápida de Aspergillus fumigatus sensu stricto a partir de amostras ambientais críticas, nomeadamente ar colhido em ambiente hospitalar. Resultados preliminares obtidos para a deteção de mutações que conferem resistência aos azóis em Aspergillus fumigatus sensu stricto, por PCR efetuado diretamente na amostra, sugerem tratar-se de uma técnica com potencial no estudo destes settings. Como conclusão, a realização desta tese permitiu caracterizar detalhadamente os isolados de Aspergillus spp. no que respeita à sua deteção, identificação molecular e suscetibilidade aos antifúngicos. Os resultados obtidos permitiram estabelecer novos objetivos para desenvolvimentos futuros.
Autores principais:	Francisco, Mariana Rato da Conceição Monteiro
Assunto:	Antifúngicos Aspergillus fumigatus Espécies crípticas Susceptibilidade Teses de mestrado - 2017
Ano:	2017
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso aberto
Instituição associada:	Universidade de Lisboa
Idioma:	português
Origem:	Repositório da Universidade de Lisboa

Descrição
Resumo:	Aspergillus sp. é um fungo potencialmente patogénico com elevada letalidade em doentes imunocomprometidos, nomeadamente transplantados e sob terapias imunossupressoras. Por se tratar de um fungo ambiental cosmopolita, a qualidade microbiológica do ambiente hospitalar que rodeia este tipo de doentes reveste-se de particular importância. Assim, este estudo teve como objetivo a deteção e caracterização de isolados de Aspergillus spp. em ambiente hospitalar. Para tal, foram analisadas 51 amostras ambientais (ar, superfície e substrato). O género fúngico mais frequentemente isolado foi Penicillium em 33% das amostras. Apesar de menos frequente, Aspergillus sp. foi isolado em 18% das amostras. O número de unidades formadoras de colónias variou entre 0 e 111 ufc/m3 no ar, 0 e 1000 ufc/m2 nas superfícies e 55 e 175 ufc/g na terra. Usando uma abordagem polifásica na identificação e apenas após aplicação de metodologias moleculares, verificou-se que 63% dos isolados eram espécies crípticas, sendo que a espécie críptica mais prevalente Aspergillus protuberus (27%), pertencente à secção de Aspergillus versicolor. Outro dos objetivos desta dissertação foi a caracterização dos padrões de susceptibilidade aos antifúngicos dos isolados de Aspergillus spp. recolhidos, para isso foram realizadas duas técnicas: meios screening (itraconazol e voriconazol) e microdiluições (anfotericina B, posaconazol e voriconazol). As metodologias mostraram elevada percentagem de concordância e apresentam-se como complementares. Não se detetaram resistências nos isolados pertencentes à secção Fumigati, enquanto os isolados da secção Versicolores foram aqueles que apresentaram valores mais elevados de concentrações mínimas inibitórias para diferentes antifúngicos. Através dos meios de screening foram ainda pesquisados isolados Aspergillus sp. resistentes aos azóis em exsudados nasais de trabalhadores de uma indústria corticeira. Foram detetados, em dois dos trabalhadores, três isolados de Aspergillus sp. com susceptibilidade reduzida ao itraconazol, dois deles pertencentes à secção Niger e um à secção Fumigati. A confirmação desta redução na susceptibilidade ao itraconazol não foi possível efectuar pelo método de referência. A otimização de um PCR específico usando o primer cyp51A permitiu desenvolver uma metodologia de PCR em tempo real com elevada sensibilidade e que permite a deteção rápida de Aspergillus fumigatus sensu stricto a partir de amostras ambientais críticas, nomeadamente ar colhido em ambiente hospitalar. Resultados preliminares obtidos para a deteção de mutações que conferem resistência aos azóis em Aspergillus fumigatus sensu stricto, por PCR efetuado diretamente na amostra, sugerem tratar-se de uma técnica com potencial no estudo destes settings. Como conclusão, a realização desta tese permitiu caracterizar detalhadamente os isolados de Aspergillus spp. no que respeita à sua deteção, identificação molecular e suscetibilidade aos antifúngicos. Os resultados obtidos permitiram estabelecer novos objetivos para desenvolvimentos futuros.