Publicação
Caracterização fenotípica e molecular de isolados de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli de origem avícola
| Resumo: | Numa perspectiva de abordagem polifásica, 187 isolados de Campylobacter spp. de origem avícola de Angola e Portugal foram submetidos a uma análise de identificação e tipificação, utilizando métodos fenotípicos e moleculares. Com a biotipagem identificaram-se 111 isolados de C. jejuni (12 de Angola e 99 de Portugal) e 76 de C. coli (55 de Angola e 21 de Portugal). A resistência a 7 antibióticos (eritromicina, claritromicina, ampicilina, estreptomicina, oxitetraciclina, ácido nalidíxico e ciprofloxacina) foi avaliada determinando as CMI's das quais resultaram 40 resistotipos entre os 143 isolados analisados, dois deles multi-resistentes. Na abordagem molecular, foi desenvolvido um método de identificação por gyrA-PCR que confirmou 101 isolados de C. jejuni e 76 de C. coli biotipicamente identificados. Os restantes 10 isolados de C. jejuni foram reclassificados como C. coli, tendo em conta os resultados obtidos com gyrA-PCR. Utilizando as endonucleases Sau3AI e HaeIII na digestão simples dos ITS e EcoRI e PstI na digestão dupla do gene flaA, as análises por ITS-ARDRA e RFLP-flaA mostraram-se incapazes de identificar estes isolados a nível de espécie. Além disso, o número reduzido de perfis-tipos obtidos revelou um baixo poder de discriminação para estas técnicas. Na tipificação dos isolados, recorreu-se ainda a análises dos polimorfismos de amplificação obtidos com os primers 1281 e 1290 (RAPD), REPI e REPII (Rep-PCR) e csM13 (M13- PCR), estimando-se valores elevados de diversidade entre os isolados de cada espécie com RAPD e Rep-PCR, enquanto que M13-PCR foi o menos diferenciante. A avaliação da reprodutibilidade, a capacidade de tipificação e o poder discriminante das técnicas de PCR-fingerprinting evidenciaram a sua maior aplicabilidade na genotipagem de Campylobacter spp.. O uso de uma abordagem polifásica, congregando todas as técnicas de PCR-fingerprinting , revelou-se como mais eficiente na tipificação e avaliação da diversidade genómica, tendo em conta a fraca estrutura clonal das populações de Campylobacter spp. analisadas. |
|---|---|
| Autores principais: | Soqui, Manuel Vangajala, 1953- |
| Assunto: | Microbiologia Teses de doutoramento |
| Ano: | 2007 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | tese de doutoramento |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | Numa perspectiva de abordagem polifásica, 187 isolados de Campylobacter spp. de origem avícola de Angola e Portugal foram submetidos a uma análise de identificação e tipificação, utilizando métodos fenotípicos e moleculares. Com a biotipagem identificaram-se 111 isolados de C. jejuni (12 de Angola e 99 de Portugal) e 76 de C. coli (55 de Angola e 21 de Portugal). A resistência a 7 antibióticos (eritromicina, claritromicina, ampicilina, estreptomicina, oxitetraciclina, ácido nalidíxico e ciprofloxacina) foi avaliada determinando as CMI's das quais resultaram 40 resistotipos entre os 143 isolados analisados, dois deles multi-resistentes. Na abordagem molecular, foi desenvolvido um método de identificação por gyrA-PCR que confirmou 101 isolados de C. jejuni e 76 de C. coli biotipicamente identificados. Os restantes 10 isolados de C. jejuni foram reclassificados como C. coli, tendo em conta os resultados obtidos com gyrA-PCR. Utilizando as endonucleases Sau3AI e HaeIII na digestão simples dos ITS e EcoRI e PstI na digestão dupla do gene flaA, as análises por ITS-ARDRA e RFLP-flaA mostraram-se incapazes de identificar estes isolados a nível de espécie. Além disso, o número reduzido de perfis-tipos obtidos revelou um baixo poder de discriminação para estas técnicas. Na tipificação dos isolados, recorreu-se ainda a análises dos polimorfismos de amplificação obtidos com os primers 1281 e 1290 (RAPD), REPI e REPII (Rep-PCR) e csM13 (M13- PCR), estimando-se valores elevados de diversidade entre os isolados de cada espécie com RAPD e Rep-PCR, enquanto que M13-PCR foi o menos diferenciante. A avaliação da reprodutibilidade, a capacidade de tipificação e o poder discriminante das técnicas de PCR-fingerprinting evidenciaram a sua maior aplicabilidade na genotipagem de Campylobacter spp.. O uso de uma abordagem polifásica, congregando todas as técnicas de PCR-fingerprinting , revelou-se como mais eficiente na tipificação e avaliação da diversidade genómica, tendo em conta a fraca estrutura clonal das populações de Campylobacter spp. analisadas. |
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