Publicação

Physico-chemical characterization of lipoplexes coated with PEG alternatives

Detalhes bibliográficos
Resumo:	O transporte de pequeno RNA de interferência (siRNA) tornou-se um mecanismo amplamente estudado para silenciar genes e tem sido útil em várias áreas, incluindo oncologia e infeciologia. No entanto, a molécula de RNA “desprotegida” encontra limitações, nomeadamente a eliminação pelo sistema reticuloendotelial e rápida remoção pela filtração glomerular. Para evitar este problema, o siRNA pode ser complexado com transportadores: os vetores não-virais têm provado ser menos imunogénicos, menos tóxicos e de maior biocompatibilidade do que os vetores virais. Um exemplo de vetores não-virais são os lipossomas que são pequenas formas esféricas compostas por uma ou mais camadas lipídicas em torno de um núcleo aquoso e são constituídos pela combinação de dois tipos de lípidos: catiónicos e sensíveis ao pH ou auxiliares. Os lípidos catiónicos partilham uma estrutura comum: grupo principal catiónico e porções hidrofóbicas com ligandos entre os domínios. O grupo principal do DOTAP é uma amónia quaternária que permite uma auto-ligação espontânea com as cargas negativas dos ácidos nucleicos, resultando esta associação em lipoplexos. Neste trabalho foram produzidos lipossomas DOTAP/Colesterol/DOPE com uma razão molar de 1/0,75/0,5 e uma razão de Azoto/Fosfato, (razão molar entre cargas positivas e negativas) de 2,5. Outros componentes que podem ser adicionados aos lipoplexos são os polímeros. A PEGuilação da superfície dos lipoplexos siRNA pode protegê-los da interação com componentes sanguíneos e prolongar o seu tempo de semivida. No entanto, o PEG pode ser imunogénico, resultando na formação de IgM anti-PEG. Para evitar este problema, o departamento LTPB da Uliège está a desenvolver novos polímeros: PNVP e polímero A (polímero confidencial). O objetivo desta investigação foi avaliar as características físico-químicas dos lipoplexos revestidos com DSPE-PEG2000, DSPE-PNVP47 e DSPE-Polímero A. Para isto, fomos analisar o tamanho médio, PDI, potencial zeta e eficiência de complexação e concluímos que os lipoplexos mantêm caraterísticas similares. A fim de avaliar a reprodutibilidade do método de produção dos novos polímeros, um novo lote foi produzido: DSPE-PNVP30 e DSPE-Polymer A2, mas estes polímeros tiveram diferentes valores de potencial zeta. Por último, fomos analisar se a adição de manitol ao meio alteraria as propriedades das lipoplexos.
Autores principais:	Aldeano, Ana Marta Tomé
Assunto:	Lipid nanoparticle Lipoplexes siRNA PEGylation Alternative polymers Mestrado integrado - 2022
Ano:	2022
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso embargado
Instituição associada:	Universidade de Lisboa
Idioma:	inglês
Origem:	Repositório da Universidade de Lisboa

Descrição
Resumo:	O transporte de pequeno RNA de interferência (siRNA) tornou-se um mecanismo amplamente estudado para silenciar genes e tem sido útil em várias áreas, incluindo oncologia e infeciologia. No entanto, a molécula de RNA “desprotegida” encontra limitações, nomeadamente a eliminação pelo sistema reticuloendotelial e rápida remoção pela filtração glomerular. Para evitar este problema, o siRNA pode ser complexado com transportadores: os vetores não-virais têm provado ser menos imunogénicos, menos tóxicos e de maior biocompatibilidade do que os vetores virais. Um exemplo de vetores não-virais são os lipossomas que são pequenas formas esféricas compostas por uma ou mais camadas lipídicas em torno de um núcleo aquoso e são constituídos pela combinação de dois tipos de lípidos: catiónicos e sensíveis ao pH ou auxiliares. Os lípidos catiónicos partilham uma estrutura comum: grupo principal catiónico e porções hidrofóbicas com ligandos entre os domínios. O grupo principal do DOTAP é uma amónia quaternária que permite uma auto-ligação espontânea com as cargas negativas dos ácidos nucleicos, resultando esta associação em lipoplexos. Neste trabalho foram produzidos lipossomas DOTAP/Colesterol/DOPE com uma razão molar de 1/0,75/0,5 e uma razão de Azoto/Fosfato, (razão molar entre cargas positivas e negativas) de 2,5. Outros componentes que podem ser adicionados aos lipoplexos são os polímeros. A PEGuilação da superfície dos lipoplexos siRNA pode protegê-los da interação com componentes sanguíneos e prolongar o seu tempo de semivida. No entanto, o PEG pode ser imunogénico, resultando na formação de IgM anti-PEG. Para evitar este problema, o departamento LTPB da Uliège está a desenvolver novos polímeros: PNVP e polímero A (polímero confidencial). O objetivo desta investigação foi avaliar as características físico-químicas dos lipoplexos revestidos com DSPE-PEG2000, DSPE-PNVP47 e DSPE-Polímero A. Para isto, fomos analisar o tamanho médio, PDI, potencial zeta e eficiência de complexação e concluímos que os lipoplexos mantêm caraterísticas similares. A fim de avaliar a reprodutibilidade do método de produção dos novos polímeros, um novo lote foi produzido: DSPE-PNVP30 e DSPE-Polymer A2, mas estes polímeros tiveram diferentes valores de potencial zeta. Por último, fomos analisar se a adição de manitol ao meio alteraria as propriedades das lipoplexos.