Publicação
Estudo da regulação da expressão do sintase de ácidos gordos de Saccharomyces cerevisiae na aquisição de resistência ao peróxido de hidrogénio
| Resumo: | A exposição das células de Saccharomyces cerevisiae a doses sub‐letais de H2O2 torna-as mais resistentes a doses letais posteriores, ocorrendo alterações na permeabilidade da membrana plasmática. As células adaptadas ao H2O2 apresentam uma menor expressão do gene FAS1 e uma diminuição da actividade do sintase de ácidos gordos. O FAS1 é regulado pelos níveis de inositol, possuindo a sequência UASINO na região promotora, sendo a expressão reprimida quando o inositol aumenta intracelularmente. Na tentativa de compreender os mecanismos moleculares envolvidos na regulação do gene FAS1 pelo H2O2, tomou‐se como premissa que o H2O2 reprime a expressão do gene FAS1 através da indução dos níveis de inositol. Determinaram‐se os níveis de inositol em células wt controlo e tratadas com 150 μM de H2O2 em estado estacionário (10 min e 20 min), observando‐se uma diminuição drástica destes níveis nas células tratadas, contrariando a hipótese inicial. Contudo, expondo células opi1Δ + GFP‐Opi1p ao H2O2 nas mesmas condições, observou‐se a translocação máxima da proteína Opi1p do retículo endoplasmático para o núcleo aos 20 min, de acordo com o mecanismo de regulação pelo inositol. Para apoiar a hipótese, quantificaram‐se os fosfolípidos cuja síntese é regulada pelo inositol e analisou‐se a expressão de alguns genes cujo produto regula essa síntese. Não foram observadas diferenças significativas na composição fosfolipídica total durante a exposição ao H2O2, excepto uma tendência para um aumento de fosfatidiletanolamina aos 5 min e uma diminuição aos 10 min, e um aumento dos níveis de fosfatidilcolina aos 20 min. O H2O2 reprimiu (INM1, INO2, CHO1, URA7 e PIS1) e induziu (GPT2) a expressão de vários genes da síntese de fosfolípidos. A expressão de INO1 foi oscilatória, sendo induzida e reprimida aos 20 e 40 min, respectivamente. A expressão de ITR1 foi reprimida logo aos 10 min. Estes resultados apoiam a existência nas células de levedura de uma resposta coordenada da expressão de genes envolvidos na biossíntese de fosfolípidos e ácidos gordos ao H2O2. |
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| Autores principais: | Cepeda, Andreia Filipa Pereira |
| Assunto: | Peróxido de hidrogénio (H2O2) FAS1 Inositol Opid1p UASino Fosfolípidos Teses de mestrado - 2010 |
| Ano: | 2010 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | A exposição das células de Saccharomyces cerevisiae a doses sub‐letais de H2O2 torna-as mais resistentes a doses letais posteriores, ocorrendo alterações na permeabilidade da membrana plasmática. As células adaptadas ao H2O2 apresentam uma menor expressão do gene FAS1 e uma diminuição da actividade do sintase de ácidos gordos. O FAS1 é regulado pelos níveis de inositol, possuindo a sequência UASINO na região promotora, sendo a expressão reprimida quando o inositol aumenta intracelularmente. Na tentativa de compreender os mecanismos moleculares envolvidos na regulação do gene FAS1 pelo H2O2, tomou‐se como premissa que o H2O2 reprime a expressão do gene FAS1 através da indução dos níveis de inositol. Determinaram‐se os níveis de inositol em células wt controlo e tratadas com 150 μM de H2O2 em estado estacionário (10 min e 20 min), observando‐se uma diminuição drástica destes níveis nas células tratadas, contrariando a hipótese inicial. Contudo, expondo células opi1Δ + GFP‐Opi1p ao H2O2 nas mesmas condições, observou‐se a translocação máxima da proteína Opi1p do retículo endoplasmático para o núcleo aos 20 min, de acordo com o mecanismo de regulação pelo inositol. Para apoiar a hipótese, quantificaram‐se os fosfolípidos cuja síntese é regulada pelo inositol e analisou‐se a expressão de alguns genes cujo produto regula essa síntese. Não foram observadas diferenças significativas na composição fosfolipídica total durante a exposição ao H2O2, excepto uma tendência para um aumento de fosfatidiletanolamina aos 5 min e uma diminuição aos 10 min, e um aumento dos níveis de fosfatidilcolina aos 20 min. O H2O2 reprimiu (INM1, INO2, CHO1, URA7 e PIS1) e induziu (GPT2) a expressão de vários genes da síntese de fosfolípidos. A expressão de INO1 foi oscilatória, sendo induzida e reprimida aos 20 e 40 min, respectivamente. A expressão de ITR1 foi reprimida logo aos 10 min. Estes resultados apoiam a existência nas células de levedura de uma resposta coordenada da expressão de genes envolvidos na biossíntese de fosfolípidos e ácidos gordos ao H2O2. |
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