Publicação
Detecção molecular de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, agente causal da podridão branca em alface (Lactuca sativa L.) pela reacção em cadeia de polimerase (PCR)
| Resumo: | Neste trabalho estabeleceu-se um teste molecular, rápido e fácil, para detectar Sclerotinia sclerotiorum, responsável pela doença da podridão branca da alface, em folhas assintomáticas. Desenharam-se primers específicos (SSM) para ampliar sequências parciais da região ITS de S. sclerotiorum, e utilizaram-se em reacções de PCR com alfaces infectadas. A análise das sequências obtidas indicou homologia significativa com sequências de S. sclerotiorum já conhecidas. Usaram-se os primers SSM com alfaces infectadas com Bremia lactucae e Botrytis cinerea verificando-se que apenas ampliavam fragmentos nas amostras com B. cinerea. A sequenciação destes fragmentos sugeriu a presença de sequências parciais de B. cinerea e também de Alternaria sp., além de S. sclerotiorum. Os fragmentos de S. sclerotiorum e Alternaria sp., com tamanho semelhante, poderão distinguir-se pela digestão dos produtos de PCR com RsaI. Alguns isolados de B. cinerea poderão ser discriminados com HindIII, mas não todos, já que outros apresentam sequências idênticas às identificadas em S. sclerotiorum. Estabeleceu-se uma reacção de PCR multiplex conjugando os primers SSM com os primers Br, específicos para ampliar sequências parciais da região ITS de B. lactucae, para detectar simultaneamente os patogénios referidos. A posterior digestão enzimática com RsaI e HindIII permite discriminar alguns daqueles patogénios |
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| Autores principais: | Caldeira, Cláudia Alexandra Oliveira Lopes |
| Assunto: | Sclerotinia sclerotiorum Bremis lactucae Lactuca sativa alface PCR ITS |
| Ano: | 2010 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade de Lisboa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Repositório da Universidade de Lisboa |
| Resumo: | Neste trabalho estabeleceu-se um teste molecular, rápido e fácil, para detectar Sclerotinia sclerotiorum, responsável pela doença da podridão branca da alface, em folhas assintomáticas. Desenharam-se primers específicos (SSM) para ampliar sequências parciais da região ITS de S. sclerotiorum, e utilizaram-se em reacções de PCR com alfaces infectadas. A análise das sequências obtidas indicou homologia significativa com sequências de S. sclerotiorum já conhecidas. Usaram-se os primers SSM com alfaces infectadas com Bremia lactucae e Botrytis cinerea verificando-se que apenas ampliavam fragmentos nas amostras com B. cinerea. A sequenciação destes fragmentos sugeriu a presença de sequências parciais de B. cinerea e também de Alternaria sp., além de S. sclerotiorum. Os fragmentos de S. sclerotiorum e Alternaria sp., com tamanho semelhante, poderão distinguir-se pela digestão dos produtos de PCR com RsaI. Alguns isolados de B. cinerea poderão ser discriminados com HindIII, mas não todos, já que outros apresentam sequências idênticas às identificadas em S. sclerotiorum. Estabeleceu-se uma reacção de PCR multiplex conjugando os primers SSM com os primers Br, específicos para ampliar sequências parciais da região ITS de B. lactucae, para detectar simultaneamente os patogénios referidos. A posterior digestão enzimática com RsaI e HindIII permite discriminar alguns daqueles patogénios |
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