Publicação

Targeting the adenosine A2B receptor may attenuate cardiac remodelling secondary to pulmonary hypertension

Detalhes bibliográficos
Resumo:	A Hipertensão Arterial Pulmonar (HAP) é uma doença complexa e multifactorial que induz uma sobrecarga no coração, devido ao aumento da resistência da circulação pulmonar. Neste cenário de aumento de resistência da circulação pulmonar, o lado direito do coração fica sobrecarregado, conduzindo à remodelação tissular do miocárdio e, eventualmente, falência do ventrículo direito (VD). A adenosina (ADO) é uma molécula de sinalização que é ubíqua e capaz de modular a função cardíaca mediante a interação com vários subtipos de recetores (A1AR, A2AAR, A2BAR e A3AR). Tem sido descrito que o bloqueio do A2BAR protege o pulmão da inflamação e fibrose, em doenças pulmonares intersticiais, embora o papel exato deste recetor sobre a progressão da remodelação ventricular na HAP, permaneça indefinido e largamente inexplorado. Neste contexto, o presente estudo pretendeu investigar o papel do A2BAR na disfunção cardíaca secundária à HAP realizando estudos in vitro com aurículas isoladas, tiras de VD e fibroblastos cardíacos (FC) em cultura. A HAP foi induzida em ratazanas Wistar machos que receberam aleatoriamente uma única injeção subcutânea de monocrotalina (grupo MCT) ou veículo (grupo CTRL). Os estudos ecocardiográficos, hemodinâmicos, miográficos (aurículas espontaneamente contráteis e tiras de VD eletricamente estimuladas) e análises morfométricas e histológicas foram realizados 21 a 25 dias após a administração de monocrotalina ou solução salina. Foram também realizados estudos de proliferação e produção de colagénio tipo I em culturas primárias de FC isolados a partir de VD. Observou-se que o A2BAR não parece modular a frequência nem a capacidade contráctil das aurículas a contrair espontaneamente, em ambos os grupos experimentais. A ativação seletiva do A2BAR, em tiras de VD, com o BAY 60-6583 (0.01–10 μM) foi desprovida de efeito inotrópico tanto em ratazanas CTRL como MCT. Contudo, o prétratamento das tiras de VD com o antagonista A2BAR, PSB 603 (100 nM), converteu o efeito inotrópico negativo do agonista não seletivo da ADO, NECA (0.01–100 μM), num efeito inotrópico positivo no grupo MCT, ao contrário do que foi observado em ratazanas CTRL. O efeito do PSB 603 (100 nM) não foi mimetizado pela inibição de algumas vias de sinalização classicamente associadas à ativação A2BAR, como a ciclase do adenilato, a fosfolipase C e a proteína cinase C. Os estudos de imunofluorescência revelaram que os cardiomiócitos de VD de ratazanas CTRL e MCT apresentavam pequenas quantidades de A2BAR. Além disso, o miocárdio ventricular direito de animais com HAP apresentava infiltrados celulares imunoreativos para A2BAR nos espaços intersticiais. Estes infiltrados celulares exibiram também imunoreatividade positiva para marcadores celulares como a vimentina (fibroblastos) e CD11b (macrófagos/monócitos). No que concerne aos FC isolados de ratazanas adultas dos grupos CTRL e MCT, estes apresentaram características de miofibroblastos já que possuiam imunorreatividade contra o domínio do recetor discoide 2 (DDR2), vimentina e actina muscular lisa (α-SMA). A incubação das culturas de FC com NECA (10 μM) aumentou a sua proliferação/viabilidade bem com a produção de colagénio do tipo I. O efeito promotor da proliferação observado com a NECA foi significativamente atenuado na presença do antagonista A2BAR, PSB 603 (100 nM), em animais MCT. O mesmo não foi observado nos animais CTRL, sugerindo que a ativação A2BAR favorece a proliferação dos FC induzida pela NECA nos animais com HAP. Resumindo, os dados mostraram que a ativação do A2BAR contribui para a diminuição da contratilidade do VD nos animais com HAP. Este efeito poderá estar relacionado com a infiltração dos espaços intersticiais do miocárdio do VD dos animais com HAP por fibroblastos e células inflamatórias que exibem imunoreactividade contra o A2BAR. A ativação destes receptores potencia a proliferação dos FC e a fibrose miocárdica, podendo ainda os infiltrados celulares detectados serem responsáveis pela libertação de mediadores químicos com características inibidoras da performance contrátil dos cardiomiócitos em animais com HAP. O impacto clínico da manipulação terapêutica dos receptores A2BAR localizados nos fibroblastos e células inflamatórias dos insterstícios miocárdicos na progressão da insuficiência cardíaca direita em indivíduos com HAP carece de estudos complementares de longa duração in vivo, incluindo ensaios hemodinâmicos, ecocardiográficos, morfométricos e histológicos.
Autores principais:	Gonçalves, Mafalda Bessa Martins
Assunto:	Circulação pulmonar Hipertensão Remodelação ventricular Monocrotalina Adenosina Ratazana Modelo animal
Ano:	2015
País:	Portugal
Tipo de documento:	dissertação de mestrado
Tipo de acesso:	acesso restrito
Instituição associada:	Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro
Idioma:	inglês
Origem:	Repositório da UTAD

Descrição
Resumo:	A Hipertensão Arterial Pulmonar (HAP) é uma doença complexa e multifactorial que induz uma sobrecarga no coração, devido ao aumento da resistência da circulação pulmonar. Neste cenário de aumento de resistência da circulação pulmonar, o lado direito do coração fica sobrecarregado, conduzindo à remodelação tissular do miocárdio e, eventualmente, falência do ventrículo direito (VD). A adenosina (ADO) é uma molécula de sinalização que é ubíqua e capaz de modular a função cardíaca mediante a interação com vários subtipos de recetores (A1AR, A2AAR, A2BAR e A3AR). Tem sido descrito que o bloqueio do A2BAR protege o pulmão da inflamação e fibrose, em doenças pulmonares intersticiais, embora o papel exato deste recetor sobre a progressão da remodelação ventricular na HAP, permaneça indefinido e largamente inexplorado. Neste contexto, o presente estudo pretendeu investigar o papel do A2BAR na disfunção cardíaca secundária à HAP realizando estudos in vitro com aurículas isoladas, tiras de VD e fibroblastos cardíacos (FC) em cultura. A HAP foi induzida em ratazanas Wistar machos que receberam aleatoriamente uma única injeção subcutânea de monocrotalina (grupo MCT) ou veículo (grupo CTRL). Os estudos ecocardiográficos, hemodinâmicos, miográficos (aurículas espontaneamente contráteis e tiras de VD eletricamente estimuladas) e análises morfométricas e histológicas foram realizados 21 a 25 dias após a administração de monocrotalina ou solução salina. Foram também realizados estudos de proliferação e produção de colagénio tipo I em culturas primárias de FC isolados a partir de VD. Observou-se que o A2BAR não parece modular a frequência nem a capacidade contráctil das aurículas a contrair espontaneamente, em ambos os grupos experimentais. A ativação seletiva do A2BAR, em tiras de VD, com o BAY 60-6583 (0.01–10 μM) foi desprovida de efeito inotrópico tanto em ratazanas CTRL como MCT. Contudo, o prétratamento das tiras de VD com o antagonista A2BAR, PSB 603 (100 nM), converteu o efeito inotrópico negativo do agonista não seletivo da ADO, NECA (0.01–100 μM), num efeito inotrópico positivo no grupo MCT, ao contrário do que foi observado em ratazanas CTRL. O efeito do PSB 603 (100 nM) não foi mimetizado pela inibição de algumas vias de sinalização classicamente associadas à ativação A2BAR, como a ciclase do adenilato, a fosfolipase C e a proteína cinase C. Os estudos de imunofluorescência revelaram que os cardiomiócitos de VD de ratazanas CTRL e MCT apresentavam pequenas quantidades de A2BAR. Além disso, o miocárdio ventricular direito de animais com HAP apresentava infiltrados celulares imunoreativos para A2BAR nos espaços intersticiais. Estes infiltrados celulares exibiram também imunoreatividade positiva para marcadores celulares como a vimentina (fibroblastos) e CD11b (macrófagos/monócitos). No que concerne aos FC isolados de ratazanas adultas dos grupos CTRL e MCT, estes apresentaram características de miofibroblastos já que possuiam imunorreatividade contra o domínio do recetor discoide 2 (DDR2), vimentina e actina muscular lisa (α-SMA). A incubação das culturas de FC com NECA (10 μM) aumentou a sua proliferação/viabilidade bem com a produção de colagénio do tipo I. O efeito promotor da proliferação observado com a NECA foi significativamente atenuado na presença do antagonista A2BAR, PSB 603 (100 nM), em animais MCT. O mesmo não foi observado nos animais CTRL, sugerindo que a ativação A2BAR favorece a proliferação dos FC induzida pela NECA nos animais com HAP. Resumindo, os dados mostraram que a ativação do A2BAR contribui para a diminuição da contratilidade do VD nos animais com HAP. Este efeito poderá estar relacionado com a infiltração dos espaços intersticiais do miocárdio do VD dos animais com HAP por fibroblastos e células inflamatórias que exibem imunoreactividade contra o A2BAR. A ativação destes receptores potencia a proliferação dos FC e a fibrose miocárdica, podendo ainda os infiltrados celulares detectados serem responsáveis pela libertação de mediadores químicos com características inibidoras da performance contrátil dos cardiomiócitos em animais com HAP. O impacto clínico da manipulação terapêutica dos receptores A2BAR localizados nos fibroblastos e células inflamatórias dos insterstícios miocárdicos na progressão da insuficiência cardíaca direita em indivíduos com HAP carece de estudos complementares de longa duração in vivo, incluindo ensaios hemodinâmicos, ecocardiográficos, morfométricos e histológicos.