Publicação
Determinação da concentração mínima inibitória aos carbapenemos por citometria de fluxo
| Resumo: | Entre os beta-lactâmicos, os carbapenemos são os antimicrobianos mais eficazes contra bactérias Gram-negativo. O aparecimento de bactérias multirresistentes ameaça seriamente essa classe de fármacos que salvam vidas. A determinação de concentrações mínimas inibitórias (CMI) aos antibióticos é atualmente considerada importante quer para o tratamento destas infeções quer para o controlo epidemiológico. Este estudo propõe um novo teste de suscetibilidade antimicrobiana baseado em citometria de fluxo para determinação rápida da CMI aos carbapenemos diretamente de hemoculturas positivas. Noventa e sete isolados clínicos de bacilos de Gram-negativo e oito estirpes de referência (ATCC), incluindo 36 Enterobacteriaceae, 36 Pseudomonas aeruginosa e 33 Acinetobacter spp., foram estudados. As hemoculturas (BD) foram inoculados com 103 bactérias/frasco e 8 mL de sangue fresco humano de dador saudável, e incubadas até positivarem. As células foram recuperadas do sangue de acordo com um protocolo previamente otimizado, incubadas durante 1 h a 37 °C, com concentrações variando entre 1 e 8 μg/mL de imipenem (IMI) e 1 e 8 μg/mL de meropenemo (MRP), e um corante fluorescente indicador do potencial de membrana celular. As células foram analisadas num citómetro de fluxo BD Accuri™C6 Plus. Para cada concentração foi calculado um índice de fluorescência (SI), que é tanto maior quanto maior for a lesão celular, e a menor concentração de fármaco que levou ao aumento da fluorescência (CFM: menor concentração do fármaco que produz um aumento do SI) foi estimada. A associação entre valores de CMI e dados citometricos foi realizada usando um modelo linear geral multivariado. O modelo estatístico estimou os valores de corte e o respetivo intervalo de confiança para a avaliação da CFM para meropenem e imipenem. A análise dos dados mostrou uma associação significativa entre a CMI dos valores de MRP e IMI e CFM com uma elevada concordância (93,06% e 96,70%). A menor concentração de fármaco que causou aumento da fluorescência, determinada por citometria de fluxo, é uma excelente abordagem para calcular os valores de CMI para carbapenemos, mostrando uma alta concordância com a metodologia clássica. Este valor foi obtido em cerca de 2 horas o que, comparando com o método padrão que demora 48h, se traduz num significativo progresso. |
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| Autores principais: | Gomes, Maria do Rosário Almeida |
| Assunto: | Citometria de fluxo Carbapenemos Teste de suscetibilidade antimicrobiana Concentração mínima inibitória Bacilos de gram negativo Flow cytometry Carbapenems Antimicrobial susceptibility testing Minimum inhibitory concentration Gram negative bacilli |
| Ano: | 2018 |
| País: | Portugal |
| Tipo de documento: | dissertação de mestrado |
| Tipo de acesso: | acesso aberto |
| Instituição associada: | Universidade Católica Portuguesa |
| Idioma: | português |
| Origem: | Veritati - Repositório Institucional da Universidade Católica Portuguesa |
| Resumo: | Entre os beta-lactâmicos, os carbapenemos são os antimicrobianos mais eficazes contra bactérias Gram-negativo. O aparecimento de bactérias multirresistentes ameaça seriamente essa classe de fármacos que salvam vidas. A determinação de concentrações mínimas inibitórias (CMI) aos antibióticos é atualmente considerada importante quer para o tratamento destas infeções quer para o controlo epidemiológico. Este estudo propõe um novo teste de suscetibilidade antimicrobiana baseado em citometria de fluxo para determinação rápida da CMI aos carbapenemos diretamente de hemoculturas positivas. Noventa e sete isolados clínicos de bacilos de Gram-negativo e oito estirpes de referência (ATCC), incluindo 36 Enterobacteriaceae, 36 Pseudomonas aeruginosa e 33 Acinetobacter spp., foram estudados. As hemoculturas (BD) foram inoculados com 103 bactérias/frasco e 8 mL de sangue fresco humano de dador saudável, e incubadas até positivarem. As células foram recuperadas do sangue de acordo com um protocolo previamente otimizado, incubadas durante 1 h a 37 °C, com concentrações variando entre 1 e 8 μg/mL de imipenem (IMI) e 1 e 8 μg/mL de meropenemo (MRP), e um corante fluorescente indicador do potencial de membrana celular. As células foram analisadas num citómetro de fluxo BD Accuri™C6 Plus. Para cada concentração foi calculado um índice de fluorescência (SI), que é tanto maior quanto maior for a lesão celular, e a menor concentração de fármaco que levou ao aumento da fluorescência (CFM: menor concentração do fármaco que produz um aumento do SI) foi estimada. A associação entre valores de CMI e dados citometricos foi realizada usando um modelo linear geral multivariado. O modelo estatístico estimou os valores de corte e o respetivo intervalo de confiança para a avaliação da CFM para meropenem e imipenem. A análise dos dados mostrou uma associação significativa entre a CMI dos valores de MRP e IMI e CFM com uma elevada concordância (93,06% e 96,70%). A menor concentração de fármaco que causou aumento da fluorescência, determinada por citometria de fluxo, é uma excelente abordagem para calcular os valores de CMI para carbapenemos, mostrando uma alta concordância com a metodologia clássica. Este valor foi obtido em cerca de 2 horas o que, comparando com o método padrão que demora 48h, se traduz num significativo progresso. |
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